Yeast two-hybrid assay
 
一、技术介绍
酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid assay）是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，通过在酵母体内重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相互作用。常用的如GAL4为基础的酵母双杂交系统，利用GAL4两个结构域：DNA结合结构域（DNA binding domain, GAL4-BD）与激活结构域（Activation domain, GAL4-AD）构建特异载体，并分别与检测蛋白融合。BD可以和上游激活序列（UAS）结合，而AD能激活UAS下游基因进行转录。单独的BD或AD不能激活基因转录，两者只有通过某种方式结合在一起形成完整的转录激活因子的功能。在酵母内表达的两个蛋白若发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD相互靠近，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选可能互作的阳性克隆。
 
酵母双杂交系统应用：
（1）对靶蛋白高通量筛选的相互作用进一步鉴定；
（2）对预测可能相互作用的蛋白进行确认；
（3）对蛋白相互作用的结构域进行鉴定
 
二、服务内容
（1）酵母双杂交载体构建；
（2）DNA诱饵序列的自激活检测及3-AT筛选浓度优化；
（3）酵母单杂交点对点检测。
 
三、客户提供样本
  目的基因序列或质粒模板。
 
四、交付结果
完整的实验报告，包括实验数据，平板图片，结果分析等。
 
五、结果展示
（1）诱饵蛋白的自激活检测；
（2）酵母双杂交点对点检测，含阴性对照组、阳性对照组和实验组平行结果。
 
 

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